Nylig er det utviklet en pålitelig, høysensitiv og rask metode for å diagnostisere ulike infeksjonssykdommer hos mennesker. Denne metoden kalles "PCR-analyse". Hva er det, hva er essensen, hvilke mikroorganismer kan det avsløre og hvordan man tar det riktig, vil vi fortelle i artikkelen vår.
Oppdagelseshistorikk
Oppfunnet polymerasekjedereaksjonsmetoden (PCR) av den amerikanske forskeren Kary Mullis i 1983. I utgangspunktet ble diagnosemetoden patentert av Cetus Corporation, der dens skaper jobbet. Men i 1992 ble alle rettigheter og patenter solgt til Hoffman-La Roche. Etter det viste det seg at lignende studier ble utført parallelt og ble registrert av andre amerikanske biologer, som Alice Chen, David Edgar, John Trell. I 1980 behandlet også sovjetiske forskere A. Slyusarenko, A. Kaledin og S. Gorodetsky dette problemet. Derfor var det umulig å fastslå den eneste rettighetshaveren. Mange fremtredende biokjemikere har gitt et visst bidrag til utviklingen av polymerasekjedereaksjonsteknikken og har patentert sine innovasjoner. For tiden er analysenPCR utføres over alt i spesialutstyrte laboratorier.
essensen av PCR-diagnosemetoden
PCR-analyse: hva er det og hvordan fungerer det? Essensen av metoden er å øke volumet av et visst mikrobielt miljø under kunstige forhold ved bruk av et spesielt DNA-polymeraseenzym. For dette multipliseres det eksisterende DNA-materialet mange ganger. Således, i nærvær av en patogen mikroorganisme i prøven, vil mengden økes på grunn av biokjemiske laboratoriemanipulasjoner, og det vil ikke være vanskelig å oppdage bakterien under et mikroskop.
Hvordan gjøres materialundersøkelser?
Påkrevd for analyse:
- DNA-matrise;
- primere som forbinder endene av et stykke materiale;
- varmebestandig DNA-polymeraseenzym;
- kjemikalier som får enzymer til å fungere ordentlig;
- bufferløsning nødvendig for å skape de rette forholdene for vekst og utvikling av DNA-materiale.
For å utføre PCR, utføres 25-30 repetisjoner, bestående av tre stadier: denaturering, annealing og elongation.
For analysen av polymerkjedereaksjonen brukes en spesiell enhet - en forsterker. Moderne utstyr lar deg stille inn det nødvendige programmet for oppvarming og kjøling av rør for å eliminere feil under diagnostikk.
Hvor brukes diagnostikk?
Polymerkjedereaksjonsmetoden brukes i ulike medisinske felt:
- kriminalister medden identifiserer genetisk materiale som hår, spytt eller blod;
- PCR-blodprøve hjelper med genotyping, for eksempel for å oppdage en individuell genetisk iboende reaksjon på et bestemt medikament;
- bruker denne metoden for å etablere tilstedeværelsen av familiebånd mellom mennesker;
- Den mest populære PCR-metoden har blitt i medisinsk diagnostikk for å bestemme ulike infeksjonssykdommer.
Hvilke infeksjoner oppdager PCR?
Så, medisin har lenge og vellykket brukt PCR-analyse. Hva det er, vet vi allerede. Og hvilke patogener kan oppdages med det? Følgende infeksjonssykdommer diagnostiseres ved PCR-metoden:
- hepatitt A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mykoplasmose;
- gardnerellose;
- infeksiøs mononukleose;
- trichomoniasis;
- papillomvirusinfeksjon;
- tuberkulose;
- herpesinfeksjon type 1 og 2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- difteri;
- salmonellose;
- HIV-infeksjon.
PCR-metoder brukes også ved diagnostisering av kreft.
metodefordeler
PCR-diagnostikk har flere fordeler:
- Høy følsomhet. Selv i nærvær av bare noen få molekyler av mikroorganisme-DNA, bestemmer PCR-analyse tilstedeværelsen av infeksjon. Metoden vil hjelpe mot kroniske og latent forekommende sykdommer. Ofte i slike tilfeller, mikroorganismener ellers ukultiverbar.
- Alle materialer er egnet for forskning, som spytt, blod, kjønnssekret, hår, epitelceller. Det vanligste er analyse av blod og urogenital utstryk for PCR.
- Ingen langsiktig beskjæring kreves. Den automatiserte diagnoseprosessen lar deg få resultatene av studien etter 4-5 timer.
- Metoden er nesten 100 % pålitelig. Bare isolerte tilfeller av falske negative resultater er registrert.
- Evnen til å identifisere flere typer patogener fra en enkelt materialprøve. Dette øker ikke bare prosessen med å diagnostisere sykdommen, men reduserer også materialkostnadene betydelig. Ofte foreskriver legen en omfattende PCR-analyse. Prisen for undersøkelsen, som består av bestemmelse av seks patogener, er omtrent 1500 rubler.
Anbefalinger for forberedelse til analyse
For at resultatene skal være pålitelige under PCR-studien, må du ta testen, i henhold til anbefalingene for foreløpig forberedelse til diagnose:
- Før du donerer spytt, bør du avstå fra å spise og ta medisiner 4 timer før prøvetaking. Umiddelbart før prosedyren, skyll munnen med kokt vann.
- Reglene ovenfor bør også følges når du tar en prøve fra den indre overflaten av kinnet. Etter skylling anbefales det å utføre en lett hudmassasje for å fremheve sekresjonen av kjertelen.
- Urin samles vanligvis hjemme. For å gjøre dette, må du gjennomføre et grundig toalettgenitalier. Samle 50-60 ml urin i en steril plastbeholder. For å sikre renheten til materialet anbefales det for kvinner å sette inn en tampong i skjeden, og for menn å trekke tilbake hudfolden så mye som mulig. Ikke doner under mensen.
- For å donere sæd, må du avstå fra samleie i 3 dager før prøvetaking. Leger fraråder også å besøke badstuen og ta et varmt bad, drikke alkohol og krydret mat. Du må ikke tisse 3 timer før testen.
- For å ta en urogenital utstryk, for eksempel, hvis det utføres en PCR-test for klamydia, anbefales både kvinner og menn å ha seksuell hvile i 3 dager. Antibakterielle legemidler bør ikke tas 2 uker før analysen. I en uke må du slutte å bruke intime geler, salver, vaginale stikkpiller, douching. 3 timer før undersøkelsen må du la være å tisse. Under menstruasjon utføres ikke prøvetaking, kun 3 dager etter opphør av blodutslipp kan du ta en urogenital utstryk.
PCR under graviditet
I løpet av forventningsperioden til babyen er mange seksuelt overførbare infeksjoner ekstremt farlige for normal utvikling av fosteret. Kjønnssykdommer kan provosere intrauterin vekstretardasjon, spontanabort eller for tidlig fødsel, medfødte misdannelser hos barnet. Derfor er det ekstremt viktig å gjennomgå en PCR-undersøkelse tidlig i svangerskapet. Det er nødvendig å bestå analysen ved registrering - opptil 12 uker.
Materialet tas fra livmorhalskanalen med en spesiell børste. Prosedyren er smertefri og utgjør ingen fare for babyen. Vanligvis under graviditet utføres en analyse for klamydia ved PCR-metoden, så vel som for ureaplasmose, mykoplasmose, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Et slikt kompleks av undersøkelser kalles PCR-6.
PCR for HIV-diagnose
På grunn av at polymerasekjedereaksjonsmetoden er svært følsom for endringer i kroppen og betingelsene for diagnosen, kan mange faktorer påvirke resultatet. Derfor er ikke PCR-analyse for HIV-infeksjon en pålitelig metode, dens effektivitet er 96–98 %. I de resterende 2-4 % av tilfellene gir testen falske positive resultater.
Men i noen situasjoner er HIV PCR-diagnostikk uunnværlig. Det gis vanligvis til personer med et falskt negativt ELISA-resultat. Slike indikatorer indikerer at en person ennå ikke har utviklet antistoffer mot viruset, og de kan ikke oppdages uten en flere økning i antallet. Dette er akkurat det som kan oppnås ved å utføre en PCR-blodprøve.
Denne diagnostikken er også nødvendig for barn i det første leveåret født av en HIV-positiv mor. Metoden er den eneste måten å pålitelig fastslå statusen til et barn.
PCR for diagnostisering av hepatitt
Polymerasekjedereaksjonsmetoden gjør det mulig å påvise DNA fra hepatitt A, B, C-virus lenge før dannelsen av antistoffer mot infeksjonen eller symptomene på sykdommen. PCR-analyse for hepatitt C er spesielt effektiv, siden denne sykdommen i 85 % av tilfellene er asymptomatisk og utenrettidig behandling går inn i det kroniske stadiet.
Rettidig påvisning av patogenet vil bidra til å unngå komplikasjoner og langtidsbehandling.
Omfattende PCR-undersøkelse
Kompleks PCR-analyse: hva er det? Dette er en undersøkelse ved bruk av den polymere kjedereaksjonsmetoden, som inkluderer bestemmelse av flere typer infeksjoner samtidig: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes type 1 og 2, gonoré, papillomavirus. Prisen på slik diagnostikk varierer fra 2000 til 3500 rubler. avhengig av klinikken, materialene og utstyret som brukes, samt av typen analyse: kvalitativ eller kvantitativ. Hva som er nødvendig i ditt tilfelle - legen bestemmer. I noen tilfeller er det nok bare å bestemme tilstedeværelsen av patogenet, i andre, for eksempel med HIV-infeksjon, spiller en kvantitativ titer en viktig rolle. Ved diagnostisering av alle de ovennevnte patogenene kalles undersøkelsen "PCR-12-analyse".
Transkripsjon av analyseresultater
Å tyde PCR-analysen er ikke vanskelig. Det er bare 2 skalaer av indikatoren - "positivt resultat" og "negativt resultat". Når et patogen oppdages, kan leger bekrefte tilstedeværelsen av sykdommen med 99% sikkerhet og begynne å behandle pasienten. Med en kvantitativ metode for å bestemme infeksjon, vil den tilsvarende kolonnen indikere den numeriske indikatoren for påviste bakterier. Bare en lege kan fastslå omfanget av sykdommen og foreskrive nødvendig behandling.
I noen tilfeller, for eksempel ved fastsettelse av HIV-infeksjon ved PCR, med et negativt resultat, blir det nødvendig å gjennomføre ytterligere undersøkelser for å bekrefte de oppnådde indikatorene.
Hvor kan jeg bli testet?
Hvor ta en PCR-test: på en offentlig klinikk eller i et privat laboratorium? Dessverre, i kommunale medisinske institusjoner er utstyret og metodene ofte utdaterte. Derfor er det bedre å gi preferanse til private laboratorier med moderne utstyr og høyt kvalifisert personell. I tillegg vil du på en privat klinikk få resultater mye raskere.
I Moskva tilbyr mange private laboratorier PCR-analyser for ulike infeksjoner. For eksempel, i slike klinikker som Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, utføres PCR-analyse. Prisen på undersøkelsen er fra 200 rubler. for å identifisere ett patogen.
Det kan konkluderes med at diagnostisering av infeksjonssykdommer ved PCR i de fleste tilfeller er en rask og pålitelig måte å oppdage patogenet i kroppen i tidlige stadier av infeksjon. Men likevel, i visse tilfeller, er det verdt å velge andre diagnostiske metoder. Bare en spesialist kan bestemme behovet for en slik studie. Å tyde PCR-analysen krever også en profesjonell tilnærming. Følg legens råd og ikke ta tester du ikke trenger.
