Colorimetrisk metode - en analyse basert på en sammenligning av fargemetningen til de undersøkte og kjente stoffene. Resultatene av fysiske og kjemiske tester er av stor verdi for mange grener av vitenskapen, men mest av all forskning brukes i medisin.
essensen av den kolorimetriske metoden
Det finnes mange typer tester som bestemmer den kjemiske sammensetningen av stoffer. Noen av dem er universelle og er mye brukt på forskjellige felt, andre er spesifikke, med høyere nøyaktighet. Den kolorimetriske metoden er universell.
Essensen av analysen ligger i det faktum at fargemetningen til en løsning med ukjent konsentrasjon sammenlignes med fargen til en standardløsning. Under analysen, som et resultat av interaksjonen av den undersøkte komponenten med et bestemt reagens, dannes en farget forbindelse. Etter at reaksjonen er fullført, sammenlignes den resulterende nyansen med fargen på løsningene, hvis konsentrasjon allerede er kjent.
Det antas at grunnleggeren av kolorimetri er Robert Boyle. Han brukte klemtanniner for å skille jern fra kobber i løsning. Det var Boyle som la merke til at jo større konsentrasjonen av jern i løsningen var, desto rikere ble tonen til sistnevnte.
Colorimetry
Colorimetri er en metode for å bestemme mengden av et stoff i løsninger. Analysen er basert på Bouguer-Lambert-Beer-loven: når en lysstråle treffer et tett absorberende lag av et stoff, svekkes dets intensitet.
Den kolorimetriske metoden for å bestemme konsentrasjonen av et stoff kan bruke en visuell sammenligning eller sammenligning med spesielle instrumenter for å måle fargeintensitet. Sammenligningen er gjort på en direkte og kompenserende måte.
- Rett. Metoden går ut på å sammenligne fargenivået til testløsningen ved en viss tetthet og temperatur på væsken med en referanseløsning. Ved bruk av fotokolorimetre og spektrofotometre brukes destillert vann som referanseløsning. Enhetene måler intensiteten til strømmen, som avhenger av intensiteten til lyset.
- kompenserende. Metoden er basert på å bringe fargen på den studerte prøven til referansen. Resultatet oppnås ved å tilsette et løsemiddel eller øke høyden på laget av det fargede mediet.
Bruk av et spektrofotometer, monokromator og andre presisjonsinstrumenter forenkler den allerede enkle metoden for forskning ytterligere og lar deg øke nøyaktigheten til resultatene. Disse enhetene er i stand til å måle mengden lystransmisjon og bestemme bølgelengden.
Hvor analyse brukes
Kolorimetrisk analysemetode brukes når den eksakte kjemiske sammensetningen er kjent, det er en referanseprøve for sammenligning, og temperaturen på testen og referanseprøven er den samme. Hvis du raskt trenger å bestemme mengden av et farget stoff, men det er så lite at det er umulig å bruke analysemetoden.
Colorimetri er mye brukt i medisin for klinisk biokjemisk forskning og andre områder:
- farmasøytisk industri;
- mat- og alkoholindustrien;
- agronomi (bestemmelse av jordkvalitet).
Fordeler og ulemper
Den kolorimetriske metoden, som alle andre, har fordeler og ulemper.
Fordelene inkluderer følgende:
- enkel analyse, minimum forberedende prosedyrer;
- mulighet for testing selv med en liten mengde testmateriale;
- det er ikke behov for dyrt utstyr, selv om moderne enheter som ikke er billige har blitt brukt i økende grad i det siste. Men de gir det mest nøyaktige resultatet.
Ulemper: lav analysenøyaktighet sammenlignet med analytiske metoder.
Biuret-metode for proteinbestemmelse
Protein i blodserum er en indikator som gjenspeiler tilstanden til homeostase. En økning i konsentrasjonen av en makromolekylær forbindelse i blodet kalles hyperproteinemi, et lavt innhold kalles hypoproteinemi.
Proteiner innblodserum har en annen sammensetning, struktur, egenskaper, utfører forskjellige funksjoner. De er delt inn i enzymer, hormoner, immunglobuliner og andre. Alle grupper av proteiner har en rekke felles kjennetegn, på grunnlag av hvilke det er utviklet metoder for bestemmelse av makromolekylære organiske forbindelser i biologiske væsker.
Av alle metodene i klinisk biokjemi er det oftest kolorimetriske metoder for å bestemme protein. De er relativt billige, noe som er viktig for budsjettorganisasjoner. og er ganske enkle. Den vanligste er biuretmetoden. Essensen av metoden: proteiner i et alkalisk miljø reagerer med kobbersulfat og danner lilla forbindelser. Proteininnholdet i blodet bestemmes av metningen av fargingen. Biomateriale for analyse tas om morgenen på tom mage.
Analysen er svært nøyaktig, men det er faktorer som påvirker konsentrasjonen av protein i blodet:
- fysisk aktivitet kort tid før prøvetaking av biomateriale;
- siste uker av svangerskapet og amming;
- bruken av legemidlene Corticotropin, Miscleron, Clofibrate øker proteininnholdet i blodet, og bruken av Pyrazinamid og østrogen - for å redusere konsentrasjonen;
- feil håndposisjon under prøvetaking av biomateriale.
Besettelse av jern
Mengden jern i blodet er en av hovedindikatorene ved diagnostisering av ulike sykdommer. Stoffet er konsentrert i hemoglobin, som sørger for transport av oksygen til vevene. Tilbestemmelse av jern ved kolorimetrisk metode, oftest brukes en løsning av bathofenantrolin (0,02%) som hovedreagens. Biomateriale - serum uten spor av hemolyse.
Essensen av metoden: samspillet mellom jernholdige ioner og sulfatert bathofenantrolin danner et farget kompleks, hvis metning bestemmes fotometrisk. For å oppnå en klar løsning er det nødvendig å følge reglene for prøvetaking av biomaterialet, men for nøyaktig å bestemme de optiske tetthetene til jern-ligandkomplekser, frigjøres jern fra hemoglobin ved bruk av hydroksylamin og vaskemidler (natriumdodecylsulfat). Testresultatet bestemmer tilstedeværelsen og graden av patologi. Normal jernkonsentrasjon bør være:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (menn);
- 10, 6-21, 7 µmol/L (kvinner).
Jernmangel er vanligvis assosiert med blodtap, utilstrekkelig kostinntak eller dårlig absorpsjon fra mage-tarmkanalen.
kolesteroltest
Kolesterol er et organisk stoff som finnes i celleveggen til mange organismer, inkludert mennesker. Det er nødvendig for produksjon av cholecalciferol og steroidhormoner. Et kolesterolnivå på 3,37-5,2 mmol/L regnes som norm alt. Forhøyet innhold er en av hovedårsakene til aterosklerose.
Colorimetriske metoder for å bestemme kolesterol lar deg gjenkjenne karsykdommer på et tidlig stadium. I følge patoanatomiske resultater i dødelig utfall av iskemi, konsentrasjonen av lipofil alkohol hos pasientervar 6,5-7,8 mmol/L.
Prinsippet for den kolorimetriske metoden er at kolesterol oksideres av 3beta-hydroksy-steroid oksidoreduktase, og frigjør hydrogenperoksid, som omdanner p-aminoatipyrin til en farget forbindelse. Innholdet av kolesterol bestemmes av fargemetningen.
Når man gjennomfører en test på et barn, må det tas hensyn til at konsentrasjonen av kolesterol i barndommen ikke bør overstige 4,1 mmol/l.
Hva er den enzymatiske kolorimetriske metoden?
Enzymatiske tester er basert på bruk av reaksjoner av enzymer med høy aktivitet. De er mye brukt i analytisk kjemi for å bestemme ulike stoffer - fra nitrationer til makromolekyler.
Enzymatiske (enzymatiske) metoder er spesifikke, og tillater analyse av visse stoffer i nærvær av andre stoffer med lignende sammensetning. De vanligste metodene basert på bruk av enzymet - glukoseoksidase. Testen brukes til å bestemme konsentrasjonen av glukose i blodet. Nøyaktigheten til testen gjør at den kan brukes til å justere dosen av hypoglykemiske midler hos pasienter med type 2 diabetes.
Glukoseoksidantmetoden regnes som en av de beste kvantitative metodene for å bestemme glukose. Både blod (kapillær) og serum kan brukes som biomateriale, men plasma er mer å foretrekke fordi det har et lavere hematokritinnhold, noe som påvirker nøyaktigheten av resultatet negativt.
Den kinetiske metoden for fotometri brukes hovedsakelig. Essensen ligger i det faktum atdet etablerte forholdet mellom glukoseoksidase og peroksidase, i en viss tid etter starten av reaksjonen, vil dannelseshastigheten til en farget forbindelse være i samsvar med nivået av glukose i prøven. Hovedfordelen med testen er at resultatet ikke påvirkes av tilstedeværelsen av tredjepartsforbindelser i prøven. Metoden har også en ulempe - det kreves dyre måleinstrumenter fra tyske eller svenske produsenter for testen.
Konklusjon
Den kolorimetriske metoden er nøyaktig og enkel å bruke. Bruken i medisin tillater tidlig oppdagelse av ulike patologiske endringer i kroppen. Med introduksjonen av nye teknologier blir metoden forbedret og blir mer og mer populær.
