Undersøkelsen av bakterier er av stor praktisk betydning for mennesker. Til dags dato har et stort antall prokaryoter blitt oppdaget, som skiller seg fra hverandre i patogenisitet, distribusjonsområde, form, størrelse, antall flageller og andre parametere. For å studere denne stammen i detalj, brukes en bakteriologisk forskningsmetode.
Hva er metodene for å analysere bakterieceller?
For å avgjøre om bakterier er sykdomsfremkallende, undersøkes kulturen på ulike måter. Blant dem:
1. Bakterioskopisk metode.
2. Bakteriologisk metode.
3. Biologisk metode.
Bakterioskopiske og bakteriologiske forskningsmetoder er basert direkte på arbeid med prokaryote celler, når det kreves biologisk analyse for å studere effekten av slike celler på den levende organismen til forsøksdyr. I henhold til graden av manifestasjon av visse tegn på sykdommen, kan forskeren gjørekonklusjon om tilstedeværelse eller fravær av patogene bakterier i prøven, samt naturlig forplante dem i dyrets kropp for å oppnå deres kultur og bruk i andre arbeider.
Den bakteriologiske metoden for forskning skiller seg fra bakterioskopisk. I den første brukes en spesi altilberedt kultur av levende prokaryoter til analyse, mens i den andre jobbes det med døde eller levende celler på et glassglass.
Stadier av den bakteriologiske forskningsmetoden. Mikrobiologi
Prinsippet med å studere egenskapene til en bakteriekultur kan være nyttig både for mikrobiologer som har satt seg som mål å studere prokaryote celler, og for laboratorieteknikere som har som oppgave å fastslå patogenisiteten eller ikke-patogenisiteten til bakterier, og diagnostiser deretter pasienten.
Metoden for å studere bakterier er delt inn i tre stadier:
1. Isolering av bakterier fra den opprinnelige prøven.
2. Sår bakterier og dyrker en ren kultur, studerer dens egenskaper.
3. Detaljert studie av bakterieceller.
Første trinn
Prøven, eller utstryket, tas fra den frie overflaten av mediet eller fra pasienten. Dermed får vi en «cocktail» av mange typer bakterier som må sås på et næringsmedium. Noen ganger blir det mulig å umiddelbart isolere de nødvendige bakteriene, og kjenne deres distribusjonsfokus i kroppen.
Etter to eller tre dager velges de ønskede koloniene ogblir sådd på fast medium av petriskåler ved hjelp av en steril løkke. Mange laboratorier arbeider med reagensrør, som kan inneholde faste eller flytende næringsmedier. Slik utføres den bakteriologiske metoden for forskning i mikrobiologi.
Andre trinn
Etter å ha oppnådd individuelle bakteriekolonier, gjennomføres en direkte makro- og mikroanalyse. Alle parametere til koloniene måles, fargen og formen til hver av dem bestemmes. Det er ikke uvanlig å telle kolonier på en petriskål og deretter i utgangsmaterialet. Dette er viktig i analysen av patogene bakterier, hvor antallet avhenger av graden av sykdommen.
Bakteriologisk forskningsmetode, hvor 2. trinn er å studere individuelle kolonier av mikroorganismer, kan assosieres med en biologisk metode for å analysere bakterier. Et annet mål med å jobbe på dette stadiet er å øke mengden kildemateriale. Dette kan gjøres på et næringsmedium, eller du kan utføre et eksperiment in vivo på levende eksperimentelle organismer. Patogene bakterier vil formere seg, og som et resultat vil blodet inneholde millioner av prokaryote celler. Det er enkelt å tilberede det nødvendige arbeidsmaterialet av bakterier fra det tatt blod.
Tredje trinn
Den viktigste delen av studien er bestemmelsen av de morfologiske, biokjemiske, toksigene og antigene egenskapene til bakteriekulturen. Det arbeides med forhåndsrensede kulturer på et næringsmedium, samt med preparater (ofte farget) under mikroskop.
Angi eierskappatogene eller opportunistiske bakterier til en eller annen systematisk gruppe, samt å bestemme deres motstand mot medisiner, tillater den bakteriologiske metoden for forskning. Trinn 3 - antibiotika, dvs. analyse av oppførselen til bakterieceller i forhold til innholdet av legemidler i miljøet.
Undersøkelsen av antibiotikaresistens i en kultur er av stor praktisk betydning når det er nødvendig å foreskrive nødvendige, og viktigst av alt, effektive legemidler til en bestemt pasient. Det er her den bakteriologiske forskningsmetoden kan hjelpe.
Hva er et vekstmedium?
For utvikling og reproduksjon må bakterier være i ferdige næringsmedier. Etter konsistens kan de være flytende eller faste, og etter opprinnelse - vegetabilsk eller animalsk.
Grunnleggende mediekrav:
1. Sterilitet.
2. Maksimal åpenhet.
3. Optimale indikatorer for surhet, osmotisk trykk, vannaktivitet og andre biologiske verdier.
Å oppnå isolerte kolonier
1. Drygalsky-metoden. Den består i det faktum at en smøre med ulike typer mikroorganismer påføres bakteriesløyfen. Denne løkken føres langs den første petriskålen med et næringsmedium. Videre, uten å endre løkken, utføres metoden for gjenværende materiale på den andre og tredje petriskålen. Så på de siste prøvene av kolonien vil ikke bakteriene bli sådd for tett, og dermed forenkle muligheten til å finne de nødvendige for arbeid.bakterier.
2. Koch metode. Den bruker reagensrør med smeltet næringsmedium. En løkke eller pipette med et utstryk av bakterier plasseres der, hvoretter innholdet i reagensrøret helles på en spesiell plate. Agar (eller gelatin) stivner etter litt tid, og det er lett å finne de ønskede cellekoloniene i tykkelsen. Det er viktig å fortynne blandingen av bakterier i reagensglass før arbeidet starter, slik at konsentrasjonen av mikroorganismer ikke blir for høy.
Den bakteriologiske forskningsmetoden, hvis stadier er basert på isolering av ønsket bakteriekultur, kan ikke klare seg uten disse to metodene for å finne isolerte kolonier.
Antibiogram
Visuelt kan bakteriers reaksjon på legemidler ses på to praktiske måter:
1. Papirdiskmetode.
2. Avl av bakterier og antibiotika i et flytende medium.
Papirskivemetoden krever en kultur av mikroorganismer som er dyrket på et fast næringsmedium. På et slikt medium legg noen stykker avrundet papir dynket i antibiotika. Hvis stoffet lykkes med å takle nøytralisering av bakterieceller, vil det etter slik behandling være et område blottet for kolonier. Hvis reaksjonen på antibiotikaen er negativ, vil bakteriene overleve.
Hvis du bruker et flytende næringsmedium, må du først klargjøre flere reagensglass med en bakteriekultur av forskjellige fortynninger. Antibiotika tilsettes disse reagensglassene, og prosessen med interaksjon mellom stoffet og mikroorganismer observeres i løpet av dagen. Som et resultat oppnås et antibiogram av høy kvalitet, ifølge hvilket det er mulig åbedømme effektiviteten til stoffet for en gitt avling.
Hovedoppgaver for analyse
Her viser målene og stadiene for den bakteriologiske metoden for forskning.
1. Skaff utgangsmaterialet som skal brukes til å isolere bakteriekolonier. Det kan være et utstryk fra overflaten av en gjenstand, slimhinne eller hulrom i et menneskelig organ, en blodprøve.
2. Dyrking av kultur på et fast næringsmedium. Etter 24-48 timer kan man finne kolonier av ulike typer bakterier på petriskålen. Vi velger den ønskede i henhold til morfologiske og/eller biokjemiske kriterier og arbeider videre med den.
3. Formering av den resulterende kulturen. Den bakteriologiske forskningsmetoden kan være basert på en mekanisk eller biologisk metode for å øke antall bakteriekulturer. I det første tilfellet arbeides det med faste eller flytende næringsmedier, hvor bakterier formerer seg i en termostat og danner nye kolonier. Den biologiske metoden krever naturlige forhold for å øke antallet bakterier, så her blir forsøksdyret infisert med mikroorganismer. Etter noen dager kan mange prokaryoter bli funnet i en blodprøve eller utstryk.
4. Arbeid med renset kultur. For å bestemme den systematiske posisjonen til bakterier, så vel som deres tilhørighet til patogener, er det nødvendig å utføre en grundig analyse av celler i henhold til morfologiske og biokjemiske egenskaper. Når du studerer patogene grupper av mikroorganismer, er det viktig å vitehvor effektive er antibiotika.
Dette var et generelt kjennetegn ved den bakteriologiske forskningsmetoden.
Funksjoner ved analysen
Hovedregelen for bakteriologisk forskning er maksimal sterilitet. Hvis du arbeider med reagensrør, bør kulturer og subkulturer av bakterier kun utføres over en oppvarmet spritlampe.
Alle stadier av den bakteriologiske forskningsmetoden krever bruk av en spesiell løkke eller en Pasteurpipette. Begge verktøyene må forbehandles i flammen til en spritlampe. Når det gjelder Pasteur-pipetten, her, før termisk sterilisering, er det nødvendig å bryte av tuppen av pipetten med en pinsett.
Teknikken med å så bakterier har også sine egne egenskaper. Først, ved inokulering på faste medier, føres en bakteriesløyfe over overflaten av agaren. Løkken skal selvfølgelig allerede ha en prøve av mikroorganismer på overflaten. Inokulering i kulturmediet praktiseres også, i så fall bør løkken eller pipetten nå bunnen av petriskålen.
Når man arbeider med flytende medier, brukes det prøverør. Her er det viktig å sørge for at væsker ikke berører kantene på laboratorieglass eller propper, og at instrumentene som brukes (pipette, løkke) ikke berører fremmedlegemer og overflater.
Betydningen av den biologiske forskningsmetoden
Bakterieprøveanalyse har sine praktiske anvendelser. Primærtbakteriologisk forskningsmetode kan brukes i medisin. For eksempel er det nødvendig å studere mikrofloraen til pasienten for å etablere riktig diagnose, samt å utvikle riktig behandlingsforløp. Et antibiogram hjelper her, som vil vise aktiviteten til medikamenter mot patogenet.
Analyse av bakterier brukes i laboratoriet for å oppdage farlige sykdommer som tuberkulose, residiverende feber eller gonoré. Den brukes også til å studere bakteriesammensetningen av mandlene, organhulene.
Bakteriologisk forskningsmetode kan brukes til å bestemme forurensning av miljøet. I henhold til dataene om den kvantitative og kvalitative sammensetningen av et utstryk fra overflaten til et objekt, bestemmes graden av populasjon av dette miljøet av mikroorganismer.
