Hepatitt C er en infeksjon i leveren forårsaket av Flaviviridae HCV-viruset, som består av ett eller flere RNA-molekyler. Som regel tas det en rekke diagnostiske tiltak for å etablere hepatitt C hos en pasient. PCR er en analyse som nøyaktig bekrefter diagnosen. Ofte er konklusjonen gitt av leger når pasienten allerede har de første tegn på sykdommen.
Hva er hepatitt C
Leverskade ved en virusinfeksjon overført gjennom blod eller seksuell kontakt kalles i medisin hepatitt C. Årsaken er et RNA-holdig virus av ikke-cellulære smittestoffer fra Flaviviridae-familien. Infeksjonen kan sitte lenge i kroppen uten å vise seg. Derfor, kun når en mikroorganisme påvises ved hjelp av en blodprøve med PCR RNA RNA, anses hepatitt C (som diagnose) som berettiget.
Flavivirus produseres ikke i kunstig dyrkede isolerte celler. I prosessen med reproduksjon skaper smittestoffet immunologisk distinkte modifikasjoner. Disse faktorene hindrer kroppen i å gipassende beskyttelsesrespons, og eksperter har problemer med å utvikle en effektiv vaksine.
Viruset overføres parenter alt. For infeksjon må det inn i tilstrekkelige mengder direkte i blodet.
Hvilke tester er gjort for hepatitt C
Virale patologier i leveren diagnostiseres ved hjelp av laboratorietester. Kliniske studier av hepatitt C utføres ved å studere fremmede og farlige antigener eller proteinforbindelser (antistoffer) i pasientens biomateriale, hovedsakelig i blodet.
- Enzymatisk immunanalyse (ELISA). Metoden er basert på påvisning av lgM-antistoffer i blodet. Immunoglobulin regnes som den største og er en pentamer. Det manifesterer seg i den primære beskyttende responsen til lymfocytter på et ukjent fremmedstoff.
- Radioimmunoassay (RIA) - kvantitativ bestemmelse av lgM-immunoglobulin ved bruk av en merket radioaktiv isotop av jod.
- PCR av hepatitt C - bestemmelse av vir alt RNA i biomaterialet (blod). Denne analysen bekrefter pålitelig diagnosen.
IgG-testing er ikke pålitelig. Dens tilstedeværelse i blodserumet kan indikere ikke bare tilstedeværelsen av et flavivirus, men også en annen tidligere infeksjon som har samme patogen.
Hva bestemmer PCR-analyse
Polymerasekjedereaksjon (PCR) er basert på identifisering av DNA-regioner spesifikke for visse patogener i prøver av materiale for forskning (epitel, blod). Analysen gjør det mulig å identifisere patogene minste organismer (virus) ved å påvise deres RNA eller DNA i biologisk materiale.
Laboratorieprosedyre for påvisning av antistoffer Hepatitt C PCR utføres i 3 trinn:
- Velg. Det studerte biomaterialet renses fra urenheter og DNA oppnås i den mobile fasen av den kromatografiske kolonnen.
- Forsterkning. Analysen utføres i enhet-termostatsyklusen. Den varmer og kjøler reagensrørene med en viss syklisitet. For en studie utføres opptil 35 sykluser. Resultatet er et tilstrekkelig antall DNA-fragmenter til å oppdage, identifisere og evaluere patogenet.
- Elektroforese. De resulterende fragmentene plasseres i en gel med forskjellig metning av agarose og elektroforese utføres. Det resulterende elektroferogrammet analyseres på en datamaskin.
Ikke bare standard PCR-studien brukes, men også sanntids PCR-analysen. Dette er sanntidsdiagnostikk. Metoden gir mulighet for kvalitativ og kvantitativ analyse, som gjør det mulig å identifisere dannelsen og dynamikken til sykdommen, samt foreskrive terapi rettet mot å eliminere årsaken til patologiens opprinnelse. Sanntids-PCR brukes også til å bestemme en ren kultur av smittestoffer (genotyping).
Hvordan utføres polymerasekjedereaksjonstesten
For diagnose kan enhver menneskelig biologisk væske brukes. Biomateriale for testing for hepatitt C er vanligvis blod.
Prøvetaking for diagnostikk utføres i prosedyrenkontor. For å ta blod, bruk engangsreagensrør med et stoff som hemmer blodpropp. Aktiviteter fokusert på å forhindre spredning av smittestoffer bidrar til å unngå at en annen stamme av mikroorganismer kommer utenfra.
Blod for PCR av hepatitt C tas om morgenen på tom mage. Prøven sendes umiddelbart til laboratoriet. Det er tillatt å lagre biomaterialet ved en temperatur på +4 til +8 grader Celsius. Beholdere er merket og utstyrt med veibeskrivelse. Testresultater er tilgjengelige innen 48 timer, noen ganger tidligere.
Typer PCR
Anvendelsesområdet for polymerasekjedereaksjonen er ganske bredt. Infeksjonister bestemmer ved hjelp av PCR hepatitt B, sykdommer overført av blodsugende insekter, AIDS, tuberkulose. I onkologi, ved bruk av denne metoden, oppdages tumorceller på et tidlig stadium.
Det finnes omtrent fjorten typer analyser. Bruken av en eller annen type avhenger av analysenes omfang og endelige resultater. Noen typer PCR er uunnværlige der resultatet er nødvendig innen 20 minutter.
For å diagnostisere hepatitt C, brukes 3 typer polymerasekjedereaksjon:
- Kvalitativ vurdering kan enten være positiv, noe som indikerer tilstedeværelsen av en infeksjon i kroppen, eller negativ, som indikerer fravær av et flavivirus.
- Sanntids-PCR (kvantitativ analyse) - bestemmer det kvantitative RNA-et til patogenet i IE/ml.
- Genotyping er en analyse som avslører typen (genotypen) av viruset.
For nøyaktig å identifisere og bestemme sykdommen, etterfulgt avalle tre typer studier brukes til å foreskrive optimal terapi.
Kvalitativ polymerasekjedereaksjonsanalyse
En analyse er obligatorisk for alle som har en ELISA som har påvist antistoffer mot HCV. Den kvalitative PCR for hepatitt C er standard følsomhetstest. Metoden er kun rettet mot deteksjon, ingen telling eller isolering av andre stoffer utføres.
For å påvise antistoffer brukes spesielle testsystemer med en sensitivitetsterskel på minst 50 IE/ml. Hvis det påvises antistoffer, foreskrives andre klargjørende tester. Hvis resultatet er negativt, vil ingen ytterligere testing bli utført.
I noen tilfeller kan et falsk negativt resultat skyldes inkompetent laboratoriepersonell eller reagenser av dårlig kvalitet. For forsikring er det bedre å ta analysen på nytt et annet sted.
kvantitativ PCR
Metoden brukes til å direkte studere antallet flavivirus i én reaksjonssyklus. For nøyaktig måling brukes DNA-fragmenter som brukes til hybridisering eller fluorescensmerkede primere. Det er et økonomisk deteksjons alternativ ved å bruke fargestoffet SYBL Green. Fargestoffet er kilt inn i et lite spor i DNA-et og blir blått når det bestråles med laser.
Konsentrasjonen bestemmes av apparat-forsterkeren i digital ekvivalent. Verdiene kan variere noe mellom laboratorier og bør derfor sammenlignes med referanseverdier.
Kvantitativ PCRhepatitt C hjelper til med å velge den optimale dosen av legemidler og bestemme varigheten av behandlingen. Hyppigheten av studien avhenger av sykdomsstadiet, typen genotype og det foreskrevne behandlingsforløpet.
Genotypebestemmelse
Hepatitt C-viruset har en variabel genetisk sammensetning. Tallrike modifikasjoner gjør det umulig å lage en vaksine, og kompliserer også terapi. Tot alt 11 genotyper og 100 undertyper er identifisert og registrert. I landene i det tidligere Sovjetunionen, hos personer infisert med hepatitt C, påviser PCR hovedsakelig genotypene 1b og 3.
I nærvær av noen av genotypene kan skrumplever eller leverkreft boltre seg. Derfor er det så viktig å oppdage viruset i tide.
For noen pasienter er visse legemidler utviklet for å bekjempe HCV giftige. Genotyping lar deg bestemme typen protein og foreskrive et effektivt medikament.
I resultatene av skrivetester er det et tall med en liten latinsk bokstav som indikerer genotypen til viruset. Hvis HCV er oppdaget, men ikke skrevet, betyr dette at personen har en genotype som ikke er typisk for et bestemt geografisk område.
Analyseresultater
Legen tar seg av å tyde resultatene. Kun data fra flere studier (sammen med anamnese og undersøkelse) kan gi et helhetlig reelt bilde av sykehistorien.
- Hos en frisk person oppdager ikke en test for en kvalitativ reaksjon i biomaterialet noe. Hvis verdien "detected" er indikert, er infeksjonen bekreftet, og pasiententrenger ytterligere diagnose etterfulgt av behandling.
- Bestemmelse av antall smittestoffer gjør det mulig å vurdere virusbelastningen på kroppen. Norm alt oppdager ikke hepatitt C kvantitativ PCR patogenet. En indikator på opptil 810^5 betraktes som en lav belastning, og med riktig terapi garanterer et gunstig resultat. Høyere verdier krever grundig undersøkelse og fastsettelse av langtidsterapi, for det positive resultatet som ingen kan gå god for.
- Positive genotypingsresultater indikerer hvilken genotype som gjenkjennes. Et negativt resultat indikerer enten fravær av et flavivirus eller tilstedeværelse av en genotype som ikke er typisk for denne regionen.
Hva indikerer en positiv PCR-test
Enhver alvorlig sykdom krever en omfattende diagnose. En positiv hepatitt C PCR bekrefter diagnosen, men spådommer kan bare gjøres etter ytterligere laboratorie- og instrumentelle studier.
Deteksjon av virus gir ikke et fullstendig bilde av patologien. Det er nødvendig å identifisere dens type og natur, for å bestemme hvordan det påvirker leveren og andre organer. Tidlig påvisning av HCV har ofte et gunstig terapeutisk resultat.
Negativ PCR med positiv ELISA
Når man observerer symptomene som er karakteristiske for leverskade, er det stor sannsynlighet for at infeksjonen allerede har kommet inn i kroppen. Derfor bør du kontakte en hepatolog eller en infeksjonsmedisinsk spesialist. Under intervjuene vil spesialisten samle inn en anamnese og foreskrive nødvendig undersøkelse.
Ifresultatene av studier på hepatitt C PCR er negative, og enzymimmunoanalysen er positiv, dette indikerer tilstedeværelsen av antistoffer mot flaviviruset i blodet. Dette skjer vanligvis når infeksjonen kommer inn i kroppen i en liten mengde, så immunsystemet taklet det på egen hånd. Men slike mennesker anses fortsatt som smittet og må undersøkes hver 6. måned. Hvis en person med slike testresultater nektes gratis legeundersøkelse, er det bedre å ta en PCR mot betaling for å opprettholde helsen, og hvis resultatene er positive, kontakt en spesialist for diagnose og behandling.
Fordeler og ulemper med metoden
Når diagnosen hepatitt C stilles, har PCR flere fordeler:
- Tidlig påvisning av patogen.
- Nøyaktig definisjon av viruset.
- Effektivitet av diagnostikk.
- Minimum feilrate.
- Høy følsomhet.
Ulemper med metoden:
- Høye analysekostnader. Testen krever dyrt utstyr, reagenser og høyt kvalifisert medisinsk personell. Alt sammen utgjør et betydelig beløp.
- Strenge krav til transport av biomateriale.
Behandling av betennelse i leveren
PCR-analyse for hepatitt C-virus anses som grunnleggende for diagnose, men ikke endelig. For at behandlingen skal være effektiv, kreves en rekke ekstra laboratorie- og instrumentelle studier. Etter å ha bestått allediagnostiske tiltak legen foreskriver behandling:
- Diett 5 er foreskrevet.
- Alkohol er fullstendig utelukket.
- Felles mottak av interferon og ribavirin i 25 dager.
- kurs av hepaprotectors "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- I spesielle tilfeller brukes diskret plasmaferese.
Medikamenter foreskrevet av hepatolog brukes regelmessig, uten å endre doseringen. Varigheten av å ta medisinene bestemmes av legen etter å ha bestått kontrolltestene. Etter å ha fullført behandlingsforløpet, må du besøke legen hver sjette måned.
PCR-diagnostikk gjør det mulig å identifisere årsaken til hepatitt C på et tidlig stadium. Dette bidrar til effektiviteten av terapi og forebygging av overgangen av sykdommen til så farlige former som skrumplever og hepatocellulært karsinom.
