Laboratoriediagnostikk av nesten alle infeksjonssykdommer er basert på påvisning av antistoffer i pasientens blod, som produseres mot patogenets antigener, ved metodene for serologiske reaksjoner. De begynte i medisinsk praksis fra slutten av det nittende til begynnelsen av det tjuende århundre.
Vitenskapens utvikling har bidratt til å bestemme den antigene strukturen til mikrober og de kjemiske formlene for deres giftstoffer. Dette gjorde det mulig å lage ikke bare terapeutiske, men også diagnostiske sera. De oppnås ved å administrere svekkede patogener til laboratoriedyr. Etter flere dagers eksponering brukes blodet fra kaniner eller mus til å forberede preparater som brukes til å identifisere mikrober eller deres giftstoffer ved hjelp av serologiske tester.
Den ytre manifestasjonen av en slik reaksjon avhenger av tilstanden til dens innstilling og av tilstanden til antigener i pasientens blod. Hvis mikrobielle partikler er uløselige, utfelles, lyseres, bindes eller immobiliseres de i serumet. Hvis antigenene er løselige, oppstår fenomenet nøytralisering eller utfelling.
Agglutinasjonsreaksjon (RA)
Den serologiske agglutinasjonstesten er svært spesifikk. Det er enkelt å utføre og stillevisuelt, for raskt å bestemme tilstedeværelsen av antigener i pasientens blodserum. Den brukes til å teste Vidal-reaksjonen (diagnose av tyfoid- og paratyfusfeber) og Weigl (tyfusfeber).
Den er basert på en spesifikk interaksjon mellom humane antistoffer (eller agglutininer) og mikrobielle celler (agglutenogener). Etter deres interaksjon dannes det partikler som utfelles. Dette er et positivt tegn. Levende eller drepte mikrobielle midler, sopp, protozoer, blodceller og somatiske celler kan brukes til å sette opp reaksjonen.
Kjemisk er reaksjonen delt inn i to trinn:
- Spesifikk kobling av antistoffer (AT) med antigener (AG).
- Ikke-spesifikk - utfelling av AG-AT-konglomerater, det vil si dannelse av agglutinat.
Indirekte agglutinasjonsreaksjon (IPHA)
Denne reaksjonen er mer følsom enn den forrige. Det brukes til å diagnostisere sykdommer forårsaket av bakterier, intracellulære parasitter og protozoer. Den er så spesifikk at selv svært lave konsentrasjoner av antistoffer kan påvises.
Rensede saueerytrocytter og menneskelige røde blodlegemer som er forhåndsbehandlet med antistoffer eller antigener, brukes til produksjonen (avhengig av hva laboratorieteknikeren ønsker å finne). I noen tilfeller blir menneskelige røde blodlegemer behandlet med immunglobuliner. Serologiske reaksjoner av erytrocytter anses å ha funnet sted dersom de har satt seg på bunnen av røret. Om en positiv reaksjonsi når cellene er ordnet i form av en omvendt paraply, som okkuperer hele bunnen. En negativ reaksjon telles hvis erytrocyttene satte seg i en kolonne eller i form av en knapp i midten av bunnen.
Nedbørsreaksjon (RP)
Serologiske reaksjoner av denne typen brukes til å oppdage ekstremt små partikler av antigener. Disse kan for eksempel være proteiner (eller deler derav), forbindelser av proteiner med lipider eller karbohydrater, deler av bakterier, deres giftstoffer.
Sera for reaksjonen oppnås ved kunstig infeksjon av dyr, vanligvis kaniner. Ved denne metoden kan du få absolutt hvilket som helst utfellende serum. Innstillingen av serologiske utfellingsreaksjoner er lik i virkningsmekanisme som agglutinasjonsreaksjoner. Antistoffer som finnes i serumet kombineres med antigener i en kolloidal løsning, og danner store proteinmolekyler som avsettes på bunnen av røret eller på underlaget (gelen). Denne metoden anses som svært spesifikk og kan oppdage selv ubetydelige mengder av et stoff.
Brukes til å diagnostisere pest, tularemi, miltbrann, hjernehinnebetennelse og andre sykdommer. I tillegg er han involvert i en rettsmedisinsk undersøkelse.
Gelutfellingsreaksjon
Serologiske reaksjoner kan utføres ikke bare i et flytende medium, men også i agargel. Dette kalles den diffuse nedbørsmetoden. Med dens hjelp studeres sammensetningen av komplekse antigene blandinger. Denne metoden er basert på kjemotakse av antigener mot antistoffer og omvendt. I en gel beveger de segmot hverandre i forskjellige hastigheter og danner nedbørslinjer. Hver linje er ett sett med AG-AT.
Eksotoksinnøytraliseringsreaksjon med antitoksin (PH)
Antitoksiske serum er i stand til å nøytralisere virkningen av eksotoksin produsert av mikroorganismer. Disse serologiske reaksjonene er basert på dette. Mikrobiologi bruker denne metoden for å titrere sera, toksiner og toksoider og bestemme deres terapeutiske aktivitet. Kraften til toksinnøytralisering bestemmes av konvensjonelle enheter - AE.
I tillegg, takket være denne reaksjonen, er det mulig å bestemme arten eller typen av eksotoksin. Dette brukes ved diagnostisering av stivkrampe, difteri, botulisme. Studien kan utføres både "på glass" og i gel.
Reaksjon av lysis (RL)
Immunserum, som kommer inn i pasientens kropp, har, i tillegg til sin hovedfunksjon passiv immunitet, også lyserende egenskaper. Den er i stand til å løse opp mikrobielle midler, cellulære fremmedelementer og virus som kommer inn i pasientens kropp. Avhengig av spesifisiteten til antistoffene som er inkludert i serumet, isoleres bakteriolysiner, cytolysiner, spiroketoliziner, hemolysiner og andre.
Disse spesifikke antistoffene kalles "komplement". Den finnes i nesten alle menneskelige kroppsvæsker, har en kompleks proteinstruktur og er ekstremt følsom for temperaturstigning, risting, syrer og direkte sollys. Men i tørket tilstand er den i stand til å beholdelyseringsegenskapene i opptil seks måneder.
Det finnes disse typene serologiske reaksjoner av denne typen:
- bakteriolyse;
- hemolyse.
Bakteriolyse utføres ved bruk av pasientens blodserum og spesifikt immunserum med levende mikrober. Hvis nok komplement er tilstede i blodet, vil forskeren se at bakteriene lyserer, og reaksjonen vil bli vurdert som positiv.
Den andre serologiske reaksjonen til blodet er at en suspensjon av pasientens røde blodlegemer behandles med serum som inneholder hemolysiner, som aktiveres kun i nærvær av en viss kompliment. Hvis det er en, observerer laboratorieassistenten oppløsningen av røde blodlegemer. Denne reaksjonen er mye brukt i moderne medisin for å bestemme komplementtiteren (det vil si den minste mengden som provoserer erytrocyttlyse) i blodserum og for å utføre en analyse for komplementfiksering. Det er på denne måten en serologisk test for syfilis gjennomføres - Wasserman-reaksjonen
Komplementfikseringsreaksjon (CFR)
Denne reaksjonen brukes til å oppdage antistoffer mot et smittestoff i pasientens blodserum, samt for å identifisere patogenet ved dets antigene struktur.
Fremtil har vi beskrevet enkle serologiske reaksjoner. RSK regnes som en kompleks reaksjon, siden ikke to, men tre elementer interagerer i den: antistoff, antigen og komplement. Dens essens ligger i det faktum at interaksjonen mellom antistoffet og antigenetforekommer bare i nærvær av komplementproteiner, som er adsorbert på overflaten av det dannede AG-AT-komplekset.
Antigenene i seg selv, etter komplementtilsetning, gjennomgår betydelige endringer, som viser kvaliteten på reaksjonen. Det kan være lyse, hemolyse, immobilisering, bakteriedrepende eller bakteriostatisk virkning.
Reaksjonen i seg selv skjer i to faser:
- Danning av et antigen-antistoffkompleks som ikke er visuelt synlig for undersøkeren.
- Endring i antigenet under virkningen av komplement. Denne fasen kan oftest spores med det blotte øye. Hvis reaksjonen ikke er visuelt synlig, brukes et ekstra indikatorsystem for å identifisere endringer.
Indikatorsystem
Denne reaksjonen er basert på komplementfiksering. Rensede ram-erytrocytter og komplementfritt hemolytisk serum tilsettes reagensrøret en time etter at RSC er satt. Hvis et ubundet komplement forblir i reagensrøret, vil det slutte seg til AG-AT-komplekset som dannes mellom saueblodceller og hemolysin, og få dem til å oppløses. Dette vil bety at RSK er negativ. Hvis erytrocyttene forble intakte, er reaksjonen derfor positiv.
hemagglutinasjonstest (RGA)
Det er to fundament alt forskjellige hemagglutinasjonsreaksjoner. En av dem er serologisk, den brukes til å bestemme blodgrupper. I dette tilfellet samhandler røde blodceller med antistoffer.
Og den andrereaksjonen gjelder ikke serologisk, siden røde blodceller reagerer med hemagglutininer produsert av virus. Siden hvert patogen bare virker på spesifikke erytrocytter (kylling, lam, ape), kan denne reaksjonen betraktes som svært spesifikk.
Du kan se om en reaksjon er positiv eller negativ ved plasseringen av blodcellene i bunnen av reagensrøret. Hvis mønsteret deres ligner en omvendt paraply, er det ønskede viruset tilstede i pasientens blod. Og hvis alle erytrocyttene har dannet seg som en myntsøyle, er det ingen ønskede patogener.
hemagglutinasjonshemmingstest (HITA)
Dette er en svært spesifikk reaksjon som lar deg bestemme typen, typen virus eller tilstedeværelsen av spesifikke antistoffer i pasientens blodserum.
Dens essens ligger i det faktum at antistoffene tilsatt i reagensrøret med testmaterialet forhindrer avsetning av antigener på erytrocytter, og dermed stopper hemagglutinasjon. Dette er et kvalitativt tegn på tilstedeværelsen i blodet av spesifikke antigener for det spesifikke viruset som søkes etter.
Immunofluorescensreaksjon (RIF)
Reaksjonen er basert på evnen til å oppdage AG-AT-komplekser med fluorescerende mikroskopi etter behandling med fluorokromfargestoffer. Denne metoden er enkel å håndtere, krever ikke isolering av ren kultur og tar liten tid. Det er uunnværlig for rask diagnostisering av infeksjonssykdommer.
I praksis er disse serologiske reaksjonene delt inn i to typer: direkte og indirekte.
Direct RIF er produsert avantigen, som er forhåndsbehandlet med fluorescerende serum. Og den indirekte er at først behandles stoffet med et konvensjonelt diagnostikk som inneholder antigener for antistoffene av interesse, og deretter blir det selvlysende serumet, som er spesifikt for proteinene i AG-AT-komplekset, påført på nytt, og mikrobielle celler bli synlig under mikroskopi.
